Компания Цитокин предлагает сервис по выделению специфических антител методом иммуноаффинной хроматографии.

Цена:

9000 руб. (стандартный сервис - очистка АТ из 100мл. субстанции)
2250 руб. (за дополнительную очистку каждых 50мл. субстанции сверх стандартного сервиса)

Стандартный сервис:

В рамках стандарного сервиса мы изготавливаем сорбент и производим выделение АТ из 100мл АТ-содержащей субстанции. В качестве субстанции для работы принимаются сыворотка или плазма крови, асцитическая жидкость и др.

Средний выход со 100 мл. сыворотки - 10-15мг специфических антител при содержании специфических АТ 1% от общего количества иммуноглобулинов. Среднее содержание АТ в асците - 3-5мг/мл.

Заказчик предоставляет: антиген для изготовления сорбента*.

*Для изготовления эффективного сорбента требуется 1-4 мг антигена на 1 мл сорбента. Однако лучше делать 5 мл сорбента, на что потребуется минимум 5 мг белка. Синтез пептидного антигена можно заказать отдельно.

Заказчик получает:

1. Специфическую фракцию иммуноглобулинов в пробирках (5мл. криовиалы)
2. Протокол с подробным описанием всего хода эксперимента.

Срок выполнения стандартного сервиса - 2 недели.

 

Методика выделения и очистки поликлональных специфичных антител иммуноаффинной хроматографией.

Метод основан на использовании ковалентно-связанного с носителем антигена пептидной природы для выделения специфичных к этому антигену кроличьих антител из сыворотки или плазмы крови. Вся процедура иммуноаффинной хроматграфии состоит из следующих стадий.

1.�?ммобилизация пептидного антигена.
В качестве носителя мы используем агарозу с присоединенным дигидразидом адипиновой кислоты. В результате непродолжительной обработки азотистой кислотой на носителе образуются активные азидные группы, к которым присоединяется пептид за счет аминогрупп. Преимущества такого типа сорбентов – низкая неспецифическая адсорбция из-за отсутствия заряда при иммобилизации гидразидов карбоновых кислот.

2.Выделение антител.
Проводится в режиме сорбция-отмывка-десорбция. Перед сорбцией сыворотка центрифугируется 14 мин при +4С со скоростью 15000 об/мин. Сорбция 40-50 мл сыворотки проводится в режиме рециркуляции  в течение 4 час. Затем колонка с сорбентом отмывается РВS, после этого – 0.5М хлористым натрием в РВS. Десорбция проводится 0.1М глицин-НСl буфером, рН 2.5. УФ-положительный при 280 нм элюент собирается в пробирки и сразу нейтрализуется 0.5М фосфатным буферным раствором.Операция с одним образцом сыворотки повторяется 4 раза для более полного извлечения антител.

3.Концентрирование антител.
Полученные образцы с растворами антител концентрируются ультрафильтрацией в ячейке с мембраной, задерживающей белки с молекулярной массой более 10,000 Да. После концентрирования определяется концентрация белка по поглощению при 280 нм. В качестве консерванта добавляется азид натрия до концентрации 0.01%.